Candida albicans expostas a antifúngicos e fagócitos aumentam a expressão gênica de aspartato proteases secretadas

Resumo

Candida albicans está entre os principais patógenos em infecções fúngicas invasivas de ambiente hospitalar. Entre os fatores associados à sua virulência está a expressão gênica de aspartato proteases secretadas (SAP). Sap2p e Sap4p são enzimas secretadas extracellularmente, Sap2p é comumente expressa em C. albicans enquanto Sap4p está associado à formação de hifas que podem contribuir para a invasão de tecidos hospedeiros e destruição de macrófagos (Mϕ). Sap9p e Sap10p estão ligadas à superfície celular fúngica pelo glicosilfosfatidilinositol, podendo ter função na interação patógeno-hospedeiro. Nesse estudo, avaliou-se a expressão dos genes SAP2, SAP4, SAP9 e SAP10 em C. albicans SC5314 cultivadas na presença ou ausência de anfotericina B, caspofungina e fluconazol e em interação com Mϕ. A linhagem celular monocítica humana de origem leucêmica (THP1) foi cultivada em meio RPMI-1640 suplementado com soro fetal bovino e antibióticos a 37ºC, sob atmosfera de 5% de CO₂. Para diferenciação das células, 10⁶ monócitos foram cultivados em meio RPMI-1640 suplementado e forbol-12-miristato-13-acetato (PMA) 100 nM por 48h. Em garrafas de cultura celular, foram cultivadas amostras de 10⁷ C. albicans/mL na presença ou ausência de 10⁶ macrófagos/mL pré-expostas ou não a concentrações inibitórias e subinibitórias de antifúngicos, a 37°C sob atmosfera de 5% de CO₂ por 1h. O RNA total das amostras foi extraído utilizando TRIzol®, após a purificação do RNA com DNase I e conversão em cDNA, os genes pesquisados foram quantificados por Reação em Cadeia de Polimerase quantitativa (qPCR) utilizando ACT1 como gene normalizador. C. albicans cultivada na presença de concentrações subinibitórias de anfotericina B, caspofungina e fluconazol apresentou regulação positiva na expressão dos SAP2, SAP4, SAP9 e SAP10, a expressão gênica foi ainda maior em leveduras cultivadas em contato com os Mϕ. A exposição de C. albicans à concentrações inibitórias (IC) dos antifúngicos mostrou um leve aumento na expressão dos genes pesquisados, entretanto, a exposição à concentrações subinibitórias induziram maior expressão desses genes, principalmente após interação com Mϕ. A amostra C. albicans pré-cultivada em ¼ da IC para anfotericina B e em contato com Mϕ apresentou um aumento médio 235,8 vezes maior na expressão de SAP9, se comparada com amostras da levedura cultivada na ausência de macrófagos e antifúngicos. C. albicans expostas a 1/8 da IC para caspofungina e em contato com Mϕ apresentou um aumento médio de 835,9 e 393,4 vezes maior na expressão de SAP2 e SAP4, respectivamente, se comparada com amostras da levedura cultivada na ausência de macrófagos e antifúngicos. Esses resultados são preocupantes porque mostram que concentrações subinibitórias de antifúngicos podem aumentar a virulência de C. albicans. Estas concentrações têm sido utilizadas como tratamento sistêmico empírico para pacientes com fatores de risco para candidíase invasiva, bem como, pode ocorrer em falha terapêutica devido a parâmetros farmacocinéticos / farmacodinâmicos ou a não adesão ao tratamento corretamente com erros de dosagem ou tempo entre as doses. Além disso, compreender a expressão desses genes na patogênese fúngica pode auxiliar na pesquisa e desenvolvimento de novos fármacos para candidíase.